Separation av proteiner och kolhydrater i mjölk med hjälp av gelfiltrering | 18 november 2011 |
�
Inledning och teori
Laborationen genomfördes i syftet att separera proteiner och kolhydrater i mjölk, samt bestämma vilken av dessa som var störst, genom att använda en metod kallad gelfiltrering. Metoden används för att separera olika stora molekyler i en homogen blandning.
Gelfiltreringen är uppdelad i tvÃÂ¥ olika faser; en stationär och en mobil. Gelen, som är uppbyggd av en polysackarid formad till smÃÂ¥, porösa kulor, utgör den stationära fasen. De vanligaste kommersiella geltyperna är bl.a. Sephadex, Bio-Gel och Styragel och används i olika grad beroende pÃÂ¥ vad som skall separeras [1]. Porernas storlek i gelkulorna är betydelsefull för resultatet och bör anpassas efter syftet med laborationen.
Den mobila fasen, eller eluenten, bestod i vÃÂ¥rt fall av natriumklorid pÃÂ¥ grund av dess förmÃÂ¥ga att lösa sig i mjölken, men även för att förhindra uttorkning av gelen.
Principen med gelfiltrering beskrivs noggrant i fig. 1. nedan.
Laborationen baserades även pÃÂ¥ tvÃÂ¥ andra välkända analysmetoder, nämligen Biuretprovet och Trommers prov, med vilka man kan identifiera proteiner och kolhydrater (för fördjupning se diskussion).
BÃÂ¥da proven utgÃÂ¥r frÃÂ¥n en blandning kallad Fehlings reagens, som bestÃÂ¥r av en blandning av Fehling I (kopparsulfat) och Fehling II (kaliumnatriumtartrat och natriumhydroxid)�
Metod
En gelfiltreringskolonn packad med Sephadex monterades till ett stativ och rengjordes med 0.9% natriumklorid (
Kolonnen droppade i slaskbägaren tills dropparna ansÃÂ¥gs ha fÃÂ¥tt en vitaktig nyans. Efter detta fylldes alla provrör i...